蛋白純化通用問題（一）

更新時(shí)間：2025-06-17

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　　那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白純化通用問題（一）。

　　1、層析柱的壽命多久，可以用多長(zhǎng)時(shí)間？

　　答：填料的使用次數(shù)依據(jù)不同的目的和條件而有差異。在使用過程中注意操作規(guī)范，定期清潔維護(hù)，可以使柱子保持*佳狀態(tài)。

　　2、柱子堵了，超壓如何處理？

　　答：可能原因：緩沖液或樣品未進(jìn)行過濾、蛋白沉淀或雜質(zhì)殘留、清洗不及時(shí)等引起層析柱濾膜堵塞；流速過快、流動(dòng)相粘度(如乙醇等)過高、溫度過低。

　　建議處理方法：首先將柱子卸下來，確定是系統(tǒng)還是柱子堵了。如果是柱子堵了：參考說明書CIP操作進(jìn)行清潔；更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗。測(cè)定柱效或重復(fù)之前做過的樣品。后續(xù)，注意樣品前處理(如核酸的去除、樣品緩沖液條件)以及層析柱的日常維護(hù)。

　　3、如何去除樣品中的DNA/RNA等核酸雜質(zhì)污染？

　　答：延長(zhǎng)超聲時(shí)間以降低粘度。也可以使用核酸酶如Benzonase同時(shí)消化DNA和RNA。如果來源是大腸桿菌裂解液，含有大量的DNA，可以用鏈霉素沉淀等方法，預(yù)先去除大量的DNA。

　　通過層析方法去除：由于核酸帶負(fù)電，在陰離子柱上會(huì)結(jié)合或陽離子柱上流穿，也可以有效去除核酸。

　　去除填料上結(jié)合的核酸：一般采用1MNaOH+1MNaCl對(duì)核酸的去除效果較好（需要確認(rèn)填料是否可耐受NaOH）。如果核酸的吸附過強(qiáng)，會(huì)采用強(qiáng)烈的方法，3M氯化鈉去除靠靜電吸附的核酸，然后用1M的*分解核酸，之后再用3MNaCl清洗。

　　可用Heparin預(yù)裝柱或者填料：如果樣品是核酸結(jié)合蛋白，Heparin可結(jié)合核酸結(jié)合蛋白，從而使核酸流穿。貨號(hào)：17040601，17099801

　　4、柱子進(jìn)氣泡或跑干了，怎么辦？

　　答：可能的原因：環(huán)境溫度變化；緩沖液未經(jīng)過脫氣；層析柱連接系統(tǒng)或操作不當(dāng)。

　　建議處理方法：用大量脫氣去離子水或20%乙醇反向高速?zèng)_洗層析柱，直到小氣泡被帶出(沖洗過程建議在系統(tǒng)連接反壓閥之后進(jìn)行）。如果大量進(jìn)氣，建議重新裝柱。

　　5、不同樣品檢測(cè)的吸光度值？

　　答：蛋白樣品較大吸收值一般在280nm，核酸或病毒在254nm或260nm；多肽215nm；多糖206nm。

　　6、柱子有色素如何去除？

　　答：色素性質(zhì)很復(fù)雜，可以根據(jù)填料的耐受情況，優(yōu)先嘗試NaOH清洗，另外，也可以使用有機(jī)溶劑（如30%異丙醇或乙醇），*后再嘗試酸，如0.01MHCl（需要確認(rèn)填料耐受性）。如果去除不掉，可以定期把色素污染部分的填料去除。

　　以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白純化通用問題（一）。

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