人操人-91片黄在线观看-在线视频一区二区三区-伊人欧美-91欧美激情一区二区三区成人-正在播放国产精品-国模大尺度视频-浮力影院国产第一页-91手机视频-在线免费观看污-亚洲男人网站-国产99免费视频-久久涩综合-日韩精品一区二区三区视频-黑人黄色大片

服務咨詢熱線:

021-66030766

TECHNICAL ARTICLES

技術文章

當前位置:首頁技術文章蛋白質技術專題:血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳

蛋白質技術專題:血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳

更新時間:2019-02-27點擊次數:2402

【原理】

瓊脂糖(agarose)是經過挑選,以質地較純的瓊脂(agar)作為原料而制成的。瓊脂在化學上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖,它具有離子交換性質,這種性質會給電泳及凝膠過濾以的影響。瓊脂糖是直鏈多糖,它由D-半乳糖和3,6-脫水-L-半乳糖的殘基交替排列組成。
瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時因凝膠含水量大(98-99%),近似自由電泳,因為固體支持物的影響少,故電泳速度快,區帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團,電滲影響很少,是一種較好的電泳材料,分離效果較好。
血清中脂類物質與血清載脂蛋白結合成水溶性的脂蛋白(lipoprotein)形式存在。各種脂蛋白中所含載脂蛋白的種類及數量不同,各種脂蛋白顆粒大小也相差很大,因此,以瓊脂糖凝膠為支持物,在電場中可使各種脂蛋白顆粒分離開來。
瓊脂糖凝膠電泳分離血清蛋白方法簡單。將血清脂蛋白用脂類染料蘇丹黑(或油紅等)進行預染。再將預染過的血清加樣于瓊脂糖凝膠板加樣槽中,通電后可以看到脂蛋白向正極移動,并分離出幾個區帶。
正常人血清脂蛋白可出現三條區帶,從陰極到陽極依次為β-脂蛋白(深),前β-脂蛋白(淺)及α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些),在原點處應無乳糜微粒。有時前β-脂蛋白也顯示不出來。
瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時因凝膠含水量大(98-99%),近似自由電泳,因為固體支持物的影響少,故電泳速度快,區帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團,電滲影響很少,是一種較好的電泳材料,分離效果較好。
血清中脂類物質與血清載脂蛋白結合成水溶性的脂蛋白(lipoprotein)形式存在。各種脂蛋白中所含載脂蛋白的種類及數量不同,各種脂蛋白顆粒大小也相差很大,因此,以瓊脂糖凝膠為支持物,在電場中可使各種脂蛋白顆粒分離開來。
瓊脂糖凝膠電泳分離血清蛋白方法簡單。將血清脂蛋白用脂類染料蘇丹黑(或油紅等)進行預染。再將預染過的血清加樣于瓊脂糖凝膠板加樣槽中,通電后可以看到脂蛋白向正極移動,并分離出幾個區帶。
正常人血清脂蛋白可出現三條區帶,從陰極到陽極依次為β-脂蛋白(深),前β-脂蛋白(淺)及α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些),在原點處應無乳糜微粒。有時前β-脂蛋白也顯示不出來。

【操作】

1、預染血清血清0.2ml中加蘇丹黑染色液0.2ml,混合置37℃水浴中染色30分鐘,離心(2000轉/分)約5分鐘。以除去懸浮于血清中染料沉渣。
2、制備瓊脂糖凝膠板將已配制好的0.5%瓊脂糖凝膠于沸水浴中加熱融化,用吸管吸取凝膠溶液澆注在載玻片上,約3 ml。靜置半小時后凝固(天熱時需延長,也可放入冰箱中數分鐘以加速凝固)。
3、點樣將剪好的濾紙條對折,以折邊在距凝膠一端2cm處切一點樣口。將毛細管插入預染好的血清中,待吸入部分血清后,取毛細管使其有樣品的一端靠于點樣口端部,停靠3秒左右。
4、電泳將凝膠板平放入電泳槽中,使加樣端接在陰極一側,用四層濾紙或紗布做成“引橋”,敷于膠板的兩端,各搭住凝膠板約1cm左右,“引橋”的另一端浸于電泳槽內的緩沖液中。接通電源,首先調節電流為3-4mA/凝膠板,電泳10-15分鐘;然后調節電流為6-7mA/凝膠板,電泳30-40分鐘,即可觀察到分離的區帶。
5、如果需要保留電泳圖譜,可將電泳后的凝膠板(連同載玻片)放入清水中浸泡脫鹽2小時,然后放烘箱(80℃左右)中烘干即可。

【試劑】
1、蘇丹黑染色液將蘇丹黑B加到無水乙醇中至飽和,搖蕩使乙酰化。用前過濾。
2、緩沖液稱取鈉15.4g、2.76g及EDTA0.29g,加水溶解后再加蒸餾水至1000ml(pH為8.6,離子強度0.075),為電極緩沖液。
3、凝膠緩沖液取三羥甲基氨基甲烷1.212g、EDTA0.29g及NaCl5.85g,用蒸餾水溶解后,稀釋至1000ml,pH為8.6。
4、瓊脂糖凝膠稱取瓊脂糖0.45 g溶于50 ml凝膠緩沖液中,再加水50 ml。在水浴中加熱至沸,待瓊脂糖*溶解后,立即停止加熱。

【注意事項】
1、電泳樣品應為新鮮的空腹血清。
2、加熱溶化瓊脂時,須防止水份蒸發過多。瓊脂糖凝膠隨用隨制,以免凝膠表面干燥,影響分離效果。
3、制作凝膠板時瓊脂糖濃度一般選用0.5%左右為宜,高于1%以上α-脂蛋白部分較緊密,β和前β-脂蛋白部分不夠清晰;低于4.5%則凝固性較差,圖譜不清。
4、點樣口要大小適宜,邊緣整齊、光滑,否則會影響電泳圖譜。
5、在α-脂蛋白前若出現較淺區帶,可列為前α-脂蛋白。

【正常參考范圍】
α-脂蛋白 20~30%
β-脂蛋白 20~30%
前β-脂蛋白 0~28%
乳糜微粒(-)

上一個:蛋白質技術專題:聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度

返回列表

下一個:蛋白質技術專題:凝膠過濾層析實驗

主站蜘蛛池模板: 欧美电影一区 | 日日操夜夜 | 一区小视频 | 欧美日韩国产在线观看 | 一区二区自拍 | 海角社区登录 | 久久国产精品视频 | 秋霞在线观看秋 | 国产性猛交96| 中文字幕一区二区三区波野结 | 久久精品噜噜噜成人88aⅴ | 欧美日韩黄色片 | 好爽…又高潮了毛片免费看 | 全国男人的天堂网 | 成人免费在线视频观看 | 污污免费在线观看 | 打屁屁日本xxxxx变态 | 老头巨大又粗又长xxxxx | 免费观看黄一级视频 | 国产黄色大片在线观看 | 潘金莲一级淫片免费放动漫 | 亚洲综合色婷婷 | 国产精品久久久久久久久久 | av片免费观看 | 激情另类小说 | 欧美三级色图 | 一个色综合网 | 国产婷婷色综合av蜜臀av | 成人免费播放视频 | 光棍影院av | 色视频免费在线观看 | 91看片网页版 | 99精品一区 | 献给魔王伊伏洛基亚吧动漫在线观看 | 国产精品热 | 色黄视频 | 亚州激情| 另类小说婷婷 | av一区三区| 亚洲免费影院 | 奇米影视亚洲春色 | 日韩av影片在线观看 | 337p亚洲精品色噜噜狠狠 | 日本精品久久久久久 | 国产福利三区 | 激情欧美一区 | 日本黄色大片免费看 | 中文字幕中文字幕 | 激情小说亚洲色图 | 可以免费看av | 牛夜精品久久久久久久99黑人 | xxxxxx日本 | 欧美在线你懂的 | 免费a级片在线观看 | 黄色一级片免费观看 | 久久aⅴ乱码一区二区三区 婷婷五月精品中文字幕 | 日韩精品一区二区三区免费视频 | 欧美一区二区三区久久久 | 麻豆一区产品精品蜜桃的特点 | 伊朗做爰xxxⅹ性视频 | 美女色网站 | 日本va在线观看 | 成人国产精品久久久 | 亚洲中出 | 青草在线视频 | 伊人网伊人网 | 欧美理论视频 | 亚洲一区在线免费观看 | 91视频官网 | 日本精品一区二区 | 色骚网| 伊人狠狠干 | 国产高潮流白浆喷水视频 | 一区二区三区观看 | 四虎最新网址在线观看 | 他趴在我两腿中间添得好爽在线看 | 亚洲二三区| 狠狠干超碰 | 国精产品乱码一区一区三区四区 | 伊人啪啪 | 无遮挡在线| 亚洲最大黄色网址 | 国产伦精品一区二区三区四区免费 | 午夜18视频在线观看 | 色婷婷一区二区三区四区 | 超碰在线公开 | www.亚洲| 久热最新 | 午夜欧美视频 | 一级黄色网 | 97伦伦午夜电影理伦片 | 韩日av一区二区 | 精品一区二区在线视频 | 中文字幕一二三四 | 激情拍拍拍 | 国产传媒第一页 | 免费在线看污 | 寂寞人妻瑜伽被教练日 | 黄色激情在线观看 |